Молекулярна клінічна діагностика Методи, Херрінгтон С, Макгі Дж, 1999 рік, скачати книгу


Автор (и): Херрінгтон С., Макгі Дж. Формат файлу: DJVU, 558 стор, 1999 р.
Опис:

У книзі авторитетного колективу авторів з Англії, Голландії, Іспанії, США та інших країн докладно описані новітні молекулярно-діагностичні методи, які знаходять все більш широке застосування в клінічних лабораторіях. Серед них: іммуноцітохіміческое генотипування клітин і його використання для діагностики ракових захворювань; гібридизація in situ, що дозволяє виявляти специфічні нуклеїнові кислоти в інтактних клітинах, зрізах тканин і мазках; полімеразна ланцюгова реакція і її застосування для виявлення мінімальних кількостей вірусної ДНК в тканинах і цитологічних препаратах. Описані також методи визначення батьківства та ідентифікації особи.
Для імунологів, вірусологів, онкологів, молекулярних біологів.

Зміст:

Передмова
Список авторів
Список скорочень

Глава 1. Молекулярні методи, що використовуються в клінічній діагностиці
1. Введення
2. Молекулярна клінічна діагностика
2.1. Фенотипування
2.2. Генотипування
2.3. Аналіз екстрактів тканин
2.4. Перспективи
Література

Глава 2. Іммуноцітохімія: світлова мікроскопія
1. Введення
2. Вибір іммуноцітохіміческого методу
3. Виготовлення препаратів
3.1. Тканинні зрізи
3.2. Мазки
4. Перші антитіла
4.1. Перевірка антитіл
4.2. Зберігання антитіл і робота з ними
5 Система іммуномеченія
5.1. Вибір системи іммуномеченія
5 2. Вибір мітки
5.3. Вибір методу
6 Контролі
6.1. Контроль реагентів
6.2. Контроль процедур
7. За лабораторним столом
7.1. Обладнання і реактиви
7.2. Підготовка до фарбування
7.3. Реагенти
7.4. Робота з препаратами
7.5. Спеціальні барвники та барвники для контрастування
7.6. Проблема браку матеріалу
7.7. Суміщення іммуноцітохіміческого аналізу з гнуч-'рідізаціей in situ
7.8. Автоматизація
8. Поліпшення якості іммуноокрашіванія
8.1. Час інкубації
8.2. Температура інкубації
8.3. Титр
8.4. Струшування
8.5. Зменшення неспецифічного фарбування
8.6. Тканинні пігменти
8.7. Детергенти
8.8. Зрізи
8.9. Повторне нашарування
8.10. Комбінація методів
9. Подвійне і потрійне фарбування
9.1. Послідовне фарбування
9.2. Одночасне фарбування
10. Деякі проблеми і способи їх вирішення
10.1. Інші зауваження
Література

Глава 3. Іммуноцітохімія: електронна мікроскопія
1. Введення
2. Практичні аспекти
2.1. Приготування зразків
2.2. Фіксація
2.3. Смоли
2.4. Приготування зрізів
2.5. Іммуномеченіе
2.6. Контролі
2.7. Фонове мечение
2.8. Несподіваний негативний результат
2.9. Кількісна обробка даних
Література

Глава 4. Методика виявлення ДНК / РНК з допомогою гібридизації in situ
1. Введення
2. Вибір методики
2.1. Нуклеїнова кислота-мішень
2.2. Чутливість
2.3. Специфічність
2.4. Лабораторні аспекти
3. Принципи гібридизації in situ
3.1. Вибір молекули-свідка
3.2. Характер зонда і його мечение
3.3. Фіксація препаратів і підготовка предметних стекол
3.4. Попередня обробка зрізів
3.5. Денатурація та гібридизація
3.6. Відмивання зразків після гібридизації та інгібі-вання ендогенної ферментативної активності
3.7. Детекція гібрідізовавшегося зонда
4. Контролі
4.1. Позитивні контролі
4.2. Негативні контролі
5. Можливі причини невдач
5.1. Розтріскування зрізів або порушення морфології тканин
5.2. Слабкий сигнал або повна його відсутність
5.3. Невідтворюваність результатів
5.4. Високий фон
6. За лабораторним столом
6.1. Обладнання
6.2. Реактиви
6.3. Автоматизація
7. Комбінування методів
7.1 Гібридизація in situ та гістологічне забарвлення
7.2. Гібридизація in situ та іммуноцітохімія
7.3. Багаторазова гібридизація in situ
8. Використання методу гібридизації in situ для діагностики захворювань
Література

Глава 5. Виявлення вірусних генів методом гібридизації in situ
1. Введення
2. Принципи методу
2.1. Підготовка предметних стекол
2.2. Виготовлення зразків
2.3. Обробка зрізів до гібридизації
2.4. Зонди
2.5. Денатурація
2.6. Умови гібридизації
2.7. Промивання препаратів після гібридизації
2.8. Системи детекції
2.9. Фарбування
3. Контроль специфічності
4. Стандартні протоколи
4.1. Гібридизація ДНК, що міститься в цитологічних препаратах, з 358-ДНК-зондами
4.2. Гібридизація ДНК, що міститься в гістологічних зрізах, з 358-ДНК-зондами
4.3. Гібридизація РНК, що міститься в тканинних зрізах, з 358-РНК-зондами
4.4. Гібридизація з біотінілірованние ДНК-зондами
5. Інтерпретація результатів
6. Кількісна оцінка
7. Чутливість методу ГІС
8. Проблеми, що виникають при гібридизації in situ
9. Застосування гібридизації in situ в клінічній діагностиці
9.1. Вірус папіломи людини
9.2. Цитомегаловірус
9.3. Вірус простого герпесу
9.4. Вірус Епштейна-Барр
9.5. Вірус гепатиту В
9.6. Вірус імунодефіциту людини
9.7. Інші віруси
Література

Глава б. Виявлення генетичних порушень в пухлинних клітинах
1. Введення
2. Методологічні аспекти
2.1. ДНК-зонди
2.2. Мічення зондів і іхдетекція
2.3. Гібридизація in situ з декількома мішенями
3. Методичні аспекти гібридизації in situ
3.1. Фіксація та обробка препаратів
3.2. Попередня обробка препаратів солідних пухлин
3.3. Визначення числа гібрідізаціонних сигналів та інтерпретація результатів
4. Практичне застосування
4.1. Інтерфазних цитогенетика і каріотипування
4.2. Інтерфазних цитогенетика і проточна цитометрия
4.3. Визначення гетерогенності пухлин
5 Висновок
Література

Глава 7. Локалізація клітинних мНРК в клінічних препаратах за допомогою ізотопно мічених РНК-зондів
1 Введення
2. Отримання зондів
2.1. Субклонірованіе ДНК-матриць у векторі для синтезу РНК
2.2. Лінеаризація вектора
2.3. Транскрипція in vitro і мічення зондів
2.4. Вибір радіоактивної мітки
2.5. Розмір зонда
3. Підготовка тканин
3.1. Робота з тканинами
3.2. Фіксація
3.3. Обробка предметних стекол
3.4. Отримання зрізів
4. Попередня обробка клітин і тканин
5. Гібридизація
6. Відмивання препаратів після гібридизації
7. Радіоавтографія
8. Одночасне проведення гібридизації in situ й ім-ноцітохіміческого аналізу
9. Контролі і специфічність гібридизації in situ
9.1. Тканина
9.2. Зонд
9.3. Специфічність гібридизації
9.4. Гістологічний контроль
10. Кількісні визначення
11. Інтерпретація даних
12. Вимоги до безпеки експериментів по гібридизації in situ із застосуванням радіоактивних ізотопів
13. Деякі приклади ГІС з мРНК в клінічних препаратах з використанням ізотопно мічених кРНК-зондів
13.1. Біоптати, отримані при хірургічних операціях
13.2. Ендоскопічні біоптати
13.3. Цитологічні препарати
13.4. Аутопсійного матеріалу
13.5. Культури тканин
Література

Глава 8. Виявлення мНРК в клінічних препаратах за допомогою неізотопних гібридизації in situ
1. Введення
1.1. Клітинні лінії як модельні системи
1.2. Контролі
2. Одержання зразків тканин і підготовка їх до гібридизації
2.1. Попередження забруднення РНКази
2.2. Зразки
2.3. Фіксація
2.4. Демаскування нуклеїнових кислот
3. Гібридизація in situ
3.1. Зонди
3.2. Предгібрідізація
3.3. Денатурація
3.4. Гібридизація
3.5. Відмивання після гібридизації
3.6. Детекція
4. Транскрипція in situ
5. Висновок
Літератур

Глава 9. Застосування гібридизації in situ для діагностики цитопатології
1. Введення I
2. Отримання матеріалу і підготовка препаратів
3. Фіксація препаратів і демаскування нуклеїнових кислот
3.1. Фіксація
3.2. Демаскування нуклеїнових кислот
4. Денатурація та гібридизація
5. Відмивання препаратів після гібридизації і детекція
5.1. Відмивання
5.2. Детекція гібрідізовавшегося зонда
6. Контролі
6.1. Паралельний контроль
6.2. Внутрішній контроль
7. Інтерпретація результатів
7.1. Локалізація сигналу
7.2. Чутливість методу
7.3. Специфічність
8. Практичне застосування гібридизації in situ
Література

Глава 10. Райони ядерцевих організатора і фібрилярні центри
1. Введення
2. Методи виявлення ЯОР / фібрилярних центрів
2.1. Застосування
2.2. Фарбування сріблом ЯОР метафазних хромосом
2.3. Фарбування сріблом інтерфазних фібрилярних центрів
3. Більш рідкісні методи виявлення ЯОР
3.1. Ультраструктурні метод
3.2. Метод, заснований на зв'язуванні іонів вісмуту
3.3. Гібридизація in situ
3.4. Послідовне застосування іммуногістоцітохі-вів методів і фарбування Ag
3.5. Іммуноцітохіміческое виявлення білків, асоційованих з ЯОР
4. Кількісне визначення AgHOP на інтерфазних хромосомах
4.1. Техніка аналізу зображень
4.2. Розмір AgHOP
5. Застосування методів, заснованих на аналізі інтерфазних AgHOP, в Гістопатологія
Література

Глава 11. Застосування проточної цитометрії в молекулярній клінічної діагностики
1. Введення
1.1. Загальні принципи проточної цитометрії
1.2. Вимірювання вмісту ДНК
2 Приготування клітинних суспензій
2.1. Дезагрегація свіжих солідних пухлин
2.2. Суспендированием архівних препаратів, залитих у парафін
3. Фарбування ДНК
3.1. Використання іншої ДНК в якості стандарту
3.2. Методи фарбування ДНК
4. Проточна цитометрия
4.1. Аналіз ДНК-гістограм
5. Мультіпараметріческіе вимірювання
5.1. Одночасне визначення вмісту ДНК і поверхневих антигенів
5.2. Визначення вмісту ДНК і включення бром-ураціддезоксірібозіда
5.3. Одночасне визначення вмісту ДНК і ядерних або цитоплазматичних антигенів
6. Застосування проточної цитометрії в клінічній діагностиці
6.1. Визначення вмісту ДНК
6.2. Одночасне визначення вмісту ДНК і клітинних антигенів
Література

Глава 12. Виділення нуклеїнових кислот з клінічних зразків і клітинних культур
1. Молекулярний аналіз нуклеїнових кислот і вивчення хвороб людини
1.1. Виділення нуклеїнових кислот
2. Виділення ДНК
2.1. Виділення ДНК з використанням протеїнази К
2.2. Виділення ДНК за допомогою швидкого фенольного методу
2 3. Виділення високомолекулярної ДНК
3. Виділення РНК
3.1. Виділення РНК з використанням протеїнази К
3 2. Виділення РНК з допомогою гуанідінтіоііаната
4. Одночасне виділення ДНК і РНК
5. Очищення poly (A) +-PHK
6. Аналіз РНК і ДНК
6.1. Якісний аналіз
6.2. Кількісний аналіз нуклеїнових кислот
7. Зберігання нуклеїнових кислот
Література

Глава 13. Отримання зондів та їх мічення
1. Введення
2. Бактеріальні плазміди
2.1. Основні положення
2.2. Отримання компетентних клітин Escherichia coli та їх трансформація бактеріальними плазмідами
2.3. Виділення та очистка плазмідної ДНК
3. Мічення нуклеїнових кислот
3.1. Введення
3.2. Радіоактивне мічення в порівнянні з нерадіоактивним
3.3. Основні методи
4. Мічення дволанцюжкової ДНК
4.1. Метод нуклеотидного заміщення (нік-трансляція)
4.2. Метод розсіяною затравки
4.3. Отримання зондів за допомогою полімеразної ланцюгової реакції
5. Синтез РНК-зондів методом транскрипції in vitro
5.1. Кодовані бактеріофагами ДНК-залежні РНК-полімерази
5.2. Вибір вектора
5.3. Отримання ДНК-матриці
5.4. Транскрипція
5.5. Переваги РНК-зондів і можливості їх застосування
6. Отримання олігонуклеотидних зондів
6.1. Типи олігонуклеотидних зондів та їх застосування
6.2 Мічення 5'-кінців
6.3. Мічення З'-решт
7. Висновок
Література

Глава 14. Гібридизація нуклеїнових кислот
1. Введення
1.1. Застосування блот-гібридизації для вивчення хвороб людини
2. Блот-гібридизація
2.1. Блот-гібридизація ДНК
2.2. Блот-гібридизація РНК
2.3. Виявлення гібрідізовавшіхся зондів
3. Зберігання фільтрів після гібридизації
Література

Глава 15. Полімеразна ланцюгова реакція і молекулярно-гене-тичні аналіз біоптатів
1. Введення
1.1. Полімеразна ланцюгова реакція
1.2. Ампліфікація РНК
2. Загальні положення
2.1. Підбір праймерів
2.2. Число циклів
2.3. Точність
3. Робота зі зразками тканин
3.1. Нативні тканини
3.2. Фіксовані тканини
3.3. Спинномозкова рідина
3.4. Тканини, заморожені в середовищі, що забезпечує оптимальні умови розрізання при даній температурі (ОСТ)
3.5. Архівні препарати
3.6. ПЛР in situ
4. Аналіз ПЛР-ампліфікованої ДНК
4.1. Підготовка ПЛР-продуктів
4.2. Гель-електрофорез
4.3. Гібридизація ПЛР-ампліфікованої ДНК по Сау-зерну
4.4. Дот-блот-гібридизація ПЛР-ампліфікованої ДНК
5. Інтерпретація результатів
5.1. Вибір контролів
5.2. Чутливість
5.3. Кількісний ПЛР-аналіз
6. Забруднення
6.1. Можливості застосування ПЛР у цілях клінічної діагностики
6.2. Лабораторна практика
6.3. Якщо забруднення вже відбулося
7. Застосування ПЛР в клінічній лабораторії
Література

Глава 16. Визначення нуклеотидної послідовності ДНК
1. Введення
2. Отримання ПЛР-ампліфікованої ДНК
3. Підготовка векторної ДНК бактеріофага М13
4. Лігування векторної та ПЛР-ампліфікованої ДНК
5. Отримання одноцепочечной рекомбінантної фагової ДНК
5.1. Виділення одноцепочечной ДНК
6. Секвенування
7. Електрофорез у гелі
7.1. Підготовка секвеніруют гелю
7.2. Нанесення зразків і проведення електрофорезу
7.3. Радіоавтографія
8. Пряме секвенування ПЛР-ампліфікованої ДНК
Література

Глава 17. Застосування ПЛР для діагностики папіломавірусної інфекції геніталій
1 Введення
1.1. Полімеразна ланцюгова реакція: огляд
1.2. Застосування ПЛР в клініці
2. Обробка клінічних зразків
2 Січень Мазки і зіскрібки
2.2. Цервікальної-вагінальний змив фізіологічним розчином
2.3. Тканини, укладені в парафін
3. Ампліфікація
3.1. Попередження забруднень
3.2. Ампліфікація гена LI HPV і Р-глобінових гена людини
3.3. Ампліфікація гена Е6 HPV
4. Аналіз ПЛР-продуктів: електрофорез
4.1. Електрофорез у поліакриламідному гелі
4.2. Рестрикційний аналіз Ll-фрагментів HPV
5. Аналіз ПЛР-продуктів: дот-блот-гібридизація
5.1. Приготування дот-блот
5.2. Синтез консервативних Ll-зондів
5.3. Гібридизація і детекція
6. Застосування молекулярних методів в лабораторних дослідженнях
Література

Глава 18. Застосування полімеразної ланцюгової реакції для скринінгу вірусів папіломи людини при цитопатології шийки матки
1. Введення
2. Виготовлення препаратів для ПЛР
3. Виявлення вірусу папіломи людини в соскобахс шийки матки
3.1. Консервативні та тіпоспеціфічние праймери
3 2. Статегія скринінгу HPV
3.3. Деякі зауваження, що стосуються скринінгу HPV
4. Клінічні аспекти
4.1. Частота виявлення HPV в препаратах
4.2. Перспективи виявлення та цитологічного скринінгу HPV
Література

Глава 19. Виявлення та ідентифікація патогенних мікроорганізмів молекулярними методами
1. Введення
2. Конструювання і вибір зондів
3. Виявлення патогенних мікроорганізмів кишкової групи методом гібридизації на колоніях
3.1. Підготовка зразків для гібридизації
3.2. Гібридизація нуклеїнових кислот, фіскірованних на нітроцелюлозних або нейлонових фільтрах, з ДНК-зондами, міченими ферментами
4. Виявлення патогенних мікроорганізмів у клінічних зразках за допомогою ПЛР
Література
Опис:файлу
Файл: 11128_molekulyarnaya-klinicheskaya-diagnostika-metody.zip
Розмір файлу: 8.17 мб
Посилання для скачування.
Натисніть на кнопку будь-якої соціальної мережі в якій ви активні. Через кілька секунд відкриються посилання для скачування.
{LikeAndRead}
Завантажити фаил з letitbit.net
Завантажити фаил з depositfiles.com
{/LikeAndRead}