Методи досліджень в імунології В 3-х томах, Лефковітс І, Перніс Б, Трукко М, Такач Б та ін, 1988 рік


Автор (и): Лефковітс І., Перніс Б., Трукко М., Такач Б. та ін Формат файлу: DJVU, 1364 стр., 1981-1988 р.
Опис:

Том 1. Колективна монографія, написана провідними фахівцями, які працювали в Базельському інституті імунології (Швейцарія), присвячена методам імунохімії та клітинної імунології. Автори мають великий досвід в цій області, що визначає основні достоїнства книги - вдалий підбір методів і вичерпне, але разом з тим короткий Опис:кожного з них. Розглянуто визначення активності антитіл, їх аналіз методом пептидних карт, дослідження білків методами електрофорезу, ізо-електрофокусірованія і ізотахофореза, методи іммунофлуорес-ценціі, культивування лімфоцитів, ізотопні та інші методи.
Для імунологів, іммунохіміков, мікробіологів, вірусологів, біохіміків, генетиків, лікарів, лаборантів науково-дослідних і клінічних лабораторій, аспірантів та студентів біологічних спеціальностей.
Том 2. Справжня книга авторів з Нідерландів, США, Швейцарії, Італія є як би продовженням раніше вийшов на російській мові видання під тією ж редакцією (Методи досліджень в імунології, М.: Мир, 1981) і разом з тим самостійної книгою. Особливу цінність представляють найактуальніші методи - метод гібридом, методи клонування функціонально активних Т-клітин і комплекс методів для дослідження окремих стадій імуногенезі in vitro. Методи відрізняються надійністю, так як відпрацьовані авторами в Базельському інституті імунології - одному з кращих в світі інститутів цього профілю.
Призначена для імунологів, іммунохіміков, мікробіологів, вірусологів, біохіміків, генетиків, лікарів, лаборантів науково-дослідних інститутів, аспірантів та студентів біологічних спеціальностей.
Том 3. Справжня книга авторів нз Нідерландів, США, Швейцарії. Італії являє собою переклад третього тому серії Immunological Methods; переклади двох перших томів випущені видавництвом у 1981 і 1983 рр.. У дану книгу ввійшли останні, найбільш актуальні методичні розробки в галузі молекулярної і клітинної імунології.
Призначена для імунологів, фахівців з молекулярної біології, цитологів, лікарів, лаборантів науково-дослідних інститутів, аспірантів та студентів біологічних спеціальностей.

Зміст:

--- ТОМ 1. Методи досліджень в імунології ---

Передмова редактора перекладу
Передмова
Список авторів

Глава 1. Оцінка якості антитіл і клітинних рецепторів
I. Введення
II. Прості рівноваги
III. Конкурентні рівноваги
Список літератури

Глава 2. Виділення та характеристика імуноглобулінів, антитіл та їх поліпептидних ланцюгів
I. Введення
II. Поділ за допомогою концентрованих розчинів нейтральних солей
III. Очищення імуноглобулінів
IV. Гель-хроматографія
V. Електрофоретичне розділення в гелі
VI. Аффинная хроматографія з використанням Імуносорбент на основі сефароза
VII. Імуносорбент на основі білків, зшитих глутарового альдегіду
VIII. Поділ поліпептидних ланцюгів
IX. Використання білка A Staphylococcus aureus в якості Імуносорбент для виділення імуноглобулінів
Список літератури

Глава 3. Метод пептидних карт для аналізу наномолярних кількостей білка
I. Призначення методу
II. Принцип методу
III. Реагенти та прилади
IV. Методика
V. Оцінка методу
VI. Приклад застосування методу для дослідження антигенних варіантів гемаглютиніну вірусу грипу А
Список літератури

Глава 4. Електрофорез білків у пластинках поліакриламідного гелю
I. Введення
II. Проведення електрофорезу в поліакриламідному гелі
III. Висновок
Список літератури

Глава 5. Вивчення імуноглобулінів методом аналітичного ізоелектрофокусірованія
I. Введення
II. Принцип методу
III. Реагенти та прилади
IV. Методики
V. Застосування, чутливість і відтворюваність ІЕФ
Список літератури

Глава 6. Препаративне виділення моноклональних антитіл за допомогою ізоелектрофокусірованія в горизонтальному шарі сефадексе G-75
I. Введення
II. Принцип методу
III. Матеріали і прилади
IV. Методика
V. Застосування
VI. Обмеження методу
VII. Ступінь очищення і чутливість
VIII. Відтворюваність
Список літератури

Глава 7. Ізотахофорез імуноглобулінів
I. Введення
II. Методика
III. Обговорення
Список літератури

Глава 8. Хімічна модифікація білків, гаптенів і нерозчинних носіїв
I. Введення
II. Теоретичні основи
III. Практичне здійснення
Список літератури

Глава 9. Флуоресціюючі антитіла та їх застосування при аналізі антигенів лімфоїдних клітин
I. Введення
II. Реагенти для иммунофлуоресценции
III. Фарбування
IV. Загальні зауваження
Список літератури

Глава 10. Радіоактивне маркування та іммуноспеціфіческое виділення макромолекулярних компонентів клітинної поверхні
I. Введення
І. Методика маркування
III. Руйнування мічених клітин
IV. Специфічна очищення мічених поверхневих компонентів клітини
Список літератури

Глава 11. Приєднання гаптенов до живих носіїв
I. Введення
II. Приготування ГСК-ефірів
III. Приєднання гаптена до носіїв
IV. Умови ЛОК в культурі
V. Висновки за результатами оцінки ЛОК у відношенні лімфоцитів, навантажених гаптеном
Список літератури

Глава 12. Отримання та аналіз мишачих антіаллотіпіческіх сироваток
I. Отримання антіаллотіпіческой сироватки
II. Кількісна оцінка антіаллотіпіческой сироватки
III. Застосування
Список літератури

Глава 13. Отримання мишачих антисироваток до антигенів гістосумісності
I. Вступні зауваження
II. Принцип методу
III. Методи
IV. Контролі
V. Критична оцінка методу
Список літератури

Глава 14. HLA-тіпірованних в реакції комплемент-залежного лімфоцитоліз
I. Введення
II. Принцип реакції
III. Деталі методу
IV. Сімейний аналіз
V. Деякі зауваження про цитотоксичних тесті
VI. Методика визначення антигенів системи HLA на В-клітинах
Список літератури

Глава 15. Змішана культура лімфоцитів (СКЛ) миші
I. Первинна СКЛ
II. Вторинна СКЛ
III. Критичні зауваження
Список літератури

Глава 16. Метод тонкого поділу розеткообразующнх клітин
I. Призначення методу
II. Принцип методу
III. Освіта розеток
IV. Фракціонування клітин
V. Вихід, виснаження, збагачення
VI. Застосування, чутливість і обмеження методу
VII. Резюме
Список літератури

Глава 17. Виявлення антигенів клітинної поверхні за допомогою розеткообразующіх еритроцитів, навантажених стафілококовим білком А
I. Введення
II. Принцип методу
III. Реагенти
IV. Методика
V. Контролі
VI. Додаткові зауваження
VII. Застосування методу
Список літератури

Глава 18. Виділення гаптен-специфічних В-лімфоцитів за допомогою Імуносорбент на основі гелю желатини, кон'югованій з гаптеном
I. Принцип методу
II. Методика
III. Застосування методу
IV. Обмеження методу
Список літератури

Глава 19. Дослідження антітелообразующіх клітин методом локального гемолізу в гелі
I. Призначення методу
II. Принцип методу
III. Реагенти та прилади
IV. Приготування клітинних суспензій
V. Різні варіанти реакції
VI. Кількісний аналіз
VII. Істотні методичні моменти
Список літератури

Глава 20. Виділення індивідуальних антітелообразующіх клітин, що дають локальний гемоліз
I. Призначення і принцип методу
II. Реактиви
III. Методика
Список літератури

Глава 21. Вивчення Т-клітин, специфічно зв'язують аллоантігени при активації в змішаній культурі лімфоцитів
I. Призначення методу
II. Принцип методу
III. Клітини і аллоантісивороткі
IV. Виявлення Т-клітинних маркерів і антигенів стимулюючих клітин на відповідальних бластів
V. Вивчення клітин, що зв'язують аллоантігени
VI. Критична оцінка: застосування методу і його обмеження
VII. Висновок
Список літератури

Глава 22. Оцінка антиген-специфічної проліферації мишачих Т-клітин
I. Призначення методу
IL Принцип методу
III. Реагенти та прилади
IV. Методика
V. Критична оцінка
Список літератури

Глава 23. Антиген-специфічний Хелперно фактор Т-клітин і його акцептор
I. Введення
II. Принцип методу
III. Реагенти та прилади
IV. Методика
V. Облік результатів
VI. Критична оцінка
Список літератури

Глава 24. Імунізація in vitro клітин мишачої селезінки в суспензії
I. Призначення методу
II. Принцип методу
III. Тварини, реагенти, прилади
IV. Методика
V. Критична оцінка методу
Список літератури

Глава 25. Індукція вторинного утворення антитіл in vitro в культурі лімфоцитів периферичної крові кролика
I. Призначення методу
II. Принцип методу
III. Реагенти
IV. Методика
V. Додаткові зауваження
Список літератури

Глава 26. Індукція імунної відповіді з високим рівнем антитіл домінуючого клонотіпа
I. Введення
II. Принцип методу
III. Приготування вакцин
IV. Імунізація
V. Серійний перенесення обмеженого числа клітин селезінки
VI. Критична оцінка
Список літератури

Глава 27. Аналіз клітинних суспензій методом лімітують розведень
I. Призначення методу
II. Принцип методу
III. Реагенти та прилади
IV. Методи
V. Обмеження і чутливість методу
Список літератури

Глава 28. Отримання і підтримка ліній мишачих лімфоїдних клітин в культурі
I. Призначення методу
II. Принцип методу
III. Реагенти, тварини, клітини і віруси
IV. Методика
V. Критична оцінка
Список літератури

Глава 29. Клонування клітин в напіврідкої або в'язкому середовищі
I. Введення
II. Реагенти
III. Методика
IV. Варіанти застосування
Список літератури

Глава 30. Приготування вірусу Сендай для гібридизації клітин
I. Вирощування вірусу
II. Титрування вірусу
III. Концентрація вірусу
IV. Інактивація вірусу
V. Оцінка інфекційності вірусу
Список літератури

Глава 31. Злиття лімфоцитів
I. Призначення методу
II. Принцип методу
III. Реагенти та прилади
IV. Методика
V. Критична оцінка
Список літератури

Глава 32. Клонування пухлинних лімфоїдних клітин в м'якому агарі. Виявлення гібридних клонів, які утворюють антитіла до баранячим еритроцитів (БЕ)
I. Призначення і принцип методу
II. Реагенти та прилади
III. Методика
IV. Критична оцінка методу
Список літератури

Глава 33. Ізотопна лабораторія
I. Введення
II. Реагенти та прилади
III. Спеціальні методики
IV. Нагляд за радіацією і радіоактивним забрудненням
Список літератури

Глава 34. Аналіз імунологічних даних
I. Введення
II. Приклади практичного використання
Список літератури

Список скорочень
Предметний покажчик


--- ТОМ 2. Імунологія. Методи досліджень ---

Від перекладача
Передмова
Список авторів
Список скорочень

Глава 1. Визначення константи рівноваги моноклональних антитіл, специфічних до антигенів клітинної поверхні
I. Введення
II. Теоретичні основи
III. Методичний підхід
IV. Приклади
V. Критична оцінка
VI. Додаток
Література

Глава 2. Біохімічний аналіз антигенів клітинної поверхні за допомогою моноклональних антитіл
I. Введення
II. Отримання антитіл
III. Методи введення мітки в антигени клітинної поверхні
IV. Приготування препаратів клітинних мембран
V. Аналіз антигенів клітинної поверхні
VI. Висновок
Література

Глава 3. Двовимірний електрофорез у гелі
I. Введення
II. Одновимірний електрофорез у поліакриламідному гелі в присутності додецилсульфату натрію (ДСН-Пагей)
III. Методи двовимірного розподілу в гелі
Література

Глава 4. Визначення антитіл до ДНК
I. Введення
II. Препарати антигенів
III. Методи визначення антитіл до ДНК
IV. Критична оцінка методів
Література

Глава 5. Рідинна хроматографія білків і пептидів при високих тисках
I. Введення
II. Основні принципи ЖХВД
III. Компоненти системи ЖХВД
IV. Приклади використання ЖХВД
Література

Глава 6. Застосування методів фізики поверхонь в імунології
I. Введення. Імунологічні феномени і фізика поверхонь
II. Введення у фізику поверхневих явищ
III. Методи вимірювань
IV. Іммунометрія в тонкому шарі
V. Висновок
Література

Глава 7. Застосування в клітинної імунології гаптенізірованних антитіл до поверхневих антигенів клітин
I. Введення
II. Непрямий метод гаптенізірованних антитіл
III. Готує реагенти для непрямого методу гаптенізірованних антитіл
IV. Приклади застосування непрямого методу гаптенізірованних антитіл
V. Критична оцінка
Література

Глава 8. HLA-DR-типування в реакції комплемент-залежного цитолізу В-лімфоцитів
I. Введення
II. Принцип методу
III. Постановка цитотоксичного тесту
IV. Модифікації тесту лімфоцітотоксічності
V. Порівняльна оцінка модифікацій методу
VI. Прилади, комерційні реагенти та розчини
Література

Глава 9. Визначення клітин, які секретують імуноглобуліни, методом зворотного пасивного локального гемолізу еритроцитів, навантажених білком A Staphylococcus aureus
I. Введення
II. Реагенти
III. Суспензії клітин
IV. Локальний гемоліз в гелі
V. Підрахунок клітин, що утворюють зони гемолізу
VT. Загальні зауваження
VII. Додаток
Література

Глава 10. Отримання in vitro та визначення активності антиген-специфічних Т-хелперних факторів
I. Введення
II. Реагенти та прилади
III. Індукція утворення антиген-специфічного хелперних фактора при культивуванні лімфоцитів по Марбруку
IV. Визначення активності антиген-специфічного хелперних фактора
V. Визначення клітин, що утворюють антитіла, методом локального гемолізу
VI. Резюме
Література

Глава 11. Визначення активності гаптен-специфічних Т-хелперів при імунній відповіді на гаптенізірованние клітинні антигени
I. Введення
II. Принципи та модифікації методу
III. Реагенти
IV. Методи
V. Додаткові зауваження
Література

Глава 12. Аналіз попередників цитотоксичних Т-лімфоцитів методом лімітують розведень
I. Принцип методу
II. Матеріали
III. Методи
IV. Схема експерименту
V. Аналіз результатів
VI. Подальший розвиток методу лімітують розведень
VII. Обмеження методу
Література

Глава 13. Індукція утворення антитіл в культурі лімфоцитів периферичної крові людини
I. Призначення методу
II. Принцип методу
III. Матеріали
IV. Методика
V. Додаткові зауваження
Література

Глава 14. Індукція утворення антитіл у кістковому мозку миші
I. Введення
П. Одержання клітин кісткового мозку миші
III. Розподіл антітелообразующіх клітин у кістковому мозку різних кісток
IV. Активність аптітелообразующіх клітин в перерахунку на весь кістковий мозок
V. Кінетика імунної відповіді
VI. Фактори, що впливають на імунну відповідь
Література

Глава 15. Тривале культивування й клонування антиген-специфічних Т-хелперів
I. Призначення і принцип методу
II. Матеріали
III. Основна методика
IV. Критична оцінка
Література

Глава 16. Клонування аллореактівних Т-клітин
I. Призначення методу
II. Принцип методу
III. Матеріали
IV. Методики
V. Критична оцінка
Література

Глава 17. Методи отримання гібридом
I. Введення
II. Попередні етапи перед злиттям
III. Приготування культуральних середовищ, їх компонентів та клітинних суспензій
IV. Злиття клітин за допомогою поліетилен гліколю
V. Продукти, синтезовані клітинами гібридом
VI. Заморожування і відтавання гібридомних клітин
Література

Глава 18. Визначення продуктів, синтезованих гібридоми, за допомогою імуноферментного методу
I. Введення
П. Матеріали
III. Імуноферментний метод
IV. Висновок
Література

Предметний покажчик


--- ТОМ 3. Імунологічні методи досліджень ---

Передмова редактора перекладу
Передмова
Список авторів
Список скорочень

Глава 1. МЕТОДИ, ЩО ЗАСТОСОВУЮТЬСЯ В молекулярної імунології: «ПРОГУЛЯНКА УЗДОВЖ ХРОМОСОМИ» В ОБЛАСТІ головного комплексу гістосумісності
I. Введення
II. Матеріали
III. Конструювання космідних бібліотек
A. Частковий гідроліз еукаріотичної ДНК
Б. Фракціонування в сахарозний градієнті
B. Ідентифікація фракцій, що містять фрагменти ДНК розміром 30-50 kb
Г. Приготування «плечей» вектора
Д. Лигирование фрагментів вектора і еукаріотичної ДНК
Є. Упаковка in vitro
Ж. Титрування
3. Розсів бібліотеки
І. Отримання реплік
К. Лізис і зв'язування з ДНК
IV. Скринінг космідних бібліотек
A. Преінкубація
Б. Гібридизація
B. Промивка
Г. Радіоавтографія, прояв, зберігання
Д. Ідентифікація та відсів позитивних колоній
Є. Повторний скринінг позитивних колоній
Ж. Зберігання космідних клонів
V. Характеристика космідних клонів
A. Виділення ДНК
Б. Аналіз методом дот-блот
B. Рестрикційної картування
Г. Виділення зондів для «прогулянки вздовж хромосоми»
VI. Критична оцінка
Література

Глава 2. ТРАНСФОРМАЦІЯ ЛІМФОЇДНИХ КЛІТИН ЗА ДОПОМОГОЮ ДНК
I. Введення
II. Домінантні селектіруемие маркери
III. Методи стабільного переносу генів
А. Копреціпітація ДНК з фосфатом кальцію
Б. Злиття бактеріальних протопластів
IV. Інші методи стабільного переносу генів
Література

Глава 3. КЛОНУВАННЯ кДНК за допомогою векторів, забезпечує експрес В КЛІТИНАХ-господарі
I. Введення
II. Загальні підходи та пов'язані з ними труднощі
III. Експериментальні процедури
A. Матеріали загального призначення і вихідні розчини
Б. Отримання полісомной мРНК
B. Підготовка вектора-затравки
Г. Отримання линкеров
Д. Синтез кДНК
Є. циклізації плазміди за допомогою лінкера, що містить oligo (dG)-концевую послідовність
Ж. Синтез другій ланцюга кДНК шляхом заміщення мРНК
3. Трансформація бактерій плазміди, отриманої на етапі III, Ж
І. Селекція за допомогою гібридизації
К. Індукція триптофанового оперона і отримання бактеріального екстракту
Л. Скринінг за допомогою антитіл
IV. Загальні зауваження
A. Метод Хейдекера - Мессінга
Б. зістикувати поліпептиди
B. Еукаріотичних система
Література

Глава 4. КОНСТРУЮВАННЯ ВЕКТОРІВ ДЛЯ «ЗВОРОТНЬОГО ГЕНЕТИКИ» Імуноглобулін
I. Введення
II. Загальна стратегія
А. Вектори для клітинної трансформації
Б. Зазвичай використовуються вектори
III. Матеріали і вихідні розчини
IV. Експериментальні процедури
A. Екстракція міні-плазмід
Б. Швидке препаративного отримання плазмід
B. Очищення фрагментів ДНК в гелі легкоплавкої агарози
Г. Лигирование виділених фрагментів з відповідним вектором
Д. Отримання компетентних бактерій за допомогою CaCl2
Є. Трансформація компетентних бактерій
Ж. Стратегія для відбору генетичних конструкцій
V. Приклади конструкцій
А. Конструкції, отримані на основі генів IgM (генів анти-TNP легкої і важкої ланцюга)
Б. Робота з клонованими генами in vitro
Література

Глава 5. МЕТОДИЧНІ ПІДХОДИ ДО синтезу олігонуклеотидів
I. Введення
II. Основні принципи синтезу
A. Тверда фаза
Б. Тріефірний метод
B. Фосфітний метод
Г. Захищені блоки елонгації
Д. Видалення захисних груп
Є. Синтез вручну на полімерному носії
Ж. Синтезатори
III. Експериментальна частина
A. Функціоналізацня скляного носія
Б. Відщеплення ціанетільной групи від тріефіров мономерів і димерів і підготовка до етапу конденсації на носії
B. Активація амідітов для реакції на носії
Г. Активація та зв'язування діефіров
Д. Проведення реакцій в умовах повної відсутності вологи
Є. Трітільний аналіз
Ж. Видалення захисних груп і очистка дезоксірібонуклеотідов після синтезу на полімерному носії
IV. Реагенти і розчинники, які необхідно очищати або готувати
Література

Глава 6. Високоефективної рідинної хроматографії (ВЖХ) БІОЛОГІЧНО АКТИВНИХ БІЛКІВ У НАНОГРАММОВИХ (ПІКОМОЛЬНИХ) кількість
I. Введення
II. Матеріали і методи
A. Обладнання
Б. Матриці для колонок
B. Визначення біологічної активності
Г. Амінокислотний аналіз
III. Поділ за розміром: гель-проникаюча хроматографія
A. Введення
Б. Реагенти та умови елюціі
B. Використання для очищення і характеристики МГФР
Г. Аналітичний варіант
Д. Перехід до Препаративна розділенню
IV. Поділ по заряду: хроматографія на іонообмінних носіях і гідроксиапатит
А. Іонообмінна хроматографія (ІОХ)
Б. Хроматографія на гідроксиапатит
V. Поділ за гідрофобним властивостям: обратнофазовая хроматографія
A. Введення
Б. Реагенти та умови елюціі
B. Використання обратнофазовой хроматографії
Г. Загальні зауваження для аналітичного варіанта поділу
Д. препаративне виділення
VI. Кількісне визначення білка і межі чутливості
А. Введення
Б. Реагенти та умови елюціі
В. Визначення по УФ-поглинання при 280 і 205 нм
Г. Порівняння помилок при кількісному визначенні білка з поглинання УФ-світла і колориметричною методами
VII. Очищення білків
A. Попередні зауваження
Б. Деякі необгрунтовані представлення
B. Робота із зразком
Г. Застосування
Д. препаративне поділ
Література

Глава 7. Високоефективної рідинної хроматографії Імуноглобулін
I. Введення
II. ВЖХ: теорія, практика та обладнання
A. Теорія
Б. Практика
B. Обладнання
III. Використання ВЖХ для очищення та дослідження імуноглобулінів
A. Загальні зауваження
Б. Гель-проникаюча ВЖХ (ГП-ВЖХ)
B. Обратнофазовая ВЖХ (ОФ-ВЖХ)
Г. ВЖХ на гідроксиапатит (ГА-ВЖХ)
IV. Обговорення
Література

Глава 8. ОТРИМАННЯ ліпосом, що містять мембранних білків ЛІМФОЦИТІВ
I. Введення
II. Виділення мембранних білків
A. Принцип методу
Б. Приготування препаратів клітинних мембран
B. Виділення мембранних глікопротеїнів
Г. Очищення індивідуальних білків за допомогою афінної хроматографії
III. Отримання ліпосом
A. Принцип методу
Б. Одержання клітинних ліпідів
B. Синтетичні ліпідні суміші
Г. Отримання ліпосом з використанням полістирольних гранул SM2
Д. Отримання ліпосом після видалення детергенту діалізом
Е. Очищення ліпосом
IV. Застосування
А. Активація цитотоксичних Т-клітин
Б. Перенесення макромолекул за рахунок злиття ліпосом з клітинами
Література

Глава 9. ВИЯВЛЕННЯ ГЛІКОЛІПІДНИХ АНТИГЕНІВ за допомогою моноклональних антитіл
I. Введення
II. Попередні тести
III. Екстракція ліпідів
A. Принцип методу
Б. Матеріали
B. Процедура екстракції
IV. Твердофазний РІА
A. Принцип методу
Б. Матеріали
B. Процедура визначення
V. Інгібування гаптенами і зв'язування гаптенов
VI. Тонкошарова хроматографія
A. Принцип методу
Б. Устаткування
B. Реактиви
Г. Обробка антитілами
Д. Хімічне фарбування
VII. Критична оцінка
Література

Глава 10. Картування НОВИХ дифференцировочного АНТИГЕНІВ В-лімфоцитів
I. Введення
II. Визначення антигенних маркерів диференціювання В-клітин за допомогою методу негативного відбору
A. Загальні вимоги до методу визначення
Б. Імунізація та злиття
B. Відбір позитивних гібридних клонів
Г. Клонування гібридів, які секретують МА
III. Аналіз антигенних маркерів диференціювання В-клітин за допомогою двовимірного електрофорезу
А. Мета і схема експерименту
Б. Техніка двовимірного електрофорезу
IV. Додаток
Література

Глава 11. ВИКОРИСТАННЯ СИСТЕМИ 1SODALT ДВОВИМІРНОГО електрофорезу для аналізу великої кількості ЗРАЗКІВ
I. Призначення методу
II. Матеріали
А. Обладнання
Б. Розчини й буфери
III. Методи
A. Біосинтетичних введення мітки
Б. Приготування зразків
B. Поділ по заряду: ISO-поділ
Г. Поділ за розміром: DALT-поділ
Д. Радіоавтографія і радіофлюорографія
IV. Критична оцінка
A. Чутливість
Б. Фарбування сріблом або біосинтетичних мечение
B. Проблема амфолінов
Г. Електроендосмос
Д. Горизонтальне перекручування смуг
Є. Зіставлення радіоавтографії і радіофлюорографіі
Література

Глава 12. Типування тканин З ВИКОРИСТАННЯМ біосинтетичних мічених моноклональних антитіл
I. Введення
А. Принцип методу
Б. Альтернативні методи
II. Біосинтетичних мечение
A. Вибір амінокислот н радіоактивного ізотопу
Б. Середовища
B. Біосинтетичних мечение
Г. Ефективність мічення
III. Очищення антитіл
А. Очищення на колонці з білком А
Б. Очищення за допомогою преципітації
IV. Активність і стабільність препаратів антитіл
V. Тест зв'язування
VI. Застосування й обмеження методу
Література

Глава 13. ТЕСТИ ДЛЯ ВИЯВЛЕННЯ лімфокінів, підтримувати зростання В-КЛІТИН
I. Введення
II. Матеріали
III. Умови попередньої активації
IV. Умови рекультівірованія
V. Вимірювання активності проліферації
Література

Глава 14. СТВОРЕННЯ КЛІТИННОГО мікрооточення для диференціювання ПОПЕРЕДНИКІВ У-КЛІТИН in vitro
I. Введення
II. Принцип методу
III. Матеріали
A. Миші
Б. Сольові розчини та середовища
B. Мікроносіях для прикрепляющихся клітин
Г. сефадексе G-I0
Д. Пластикова культуральна посуд
IV. Проведення дослідів
A. Збір клітин кісткового мозку миші
Б. Створення мікрооточення кісткомозкові клітин
B. Приготування кісткомозкові попередників В-клітин
Г. Дозрівання культур
Д. Визначення функціонально активних В-клітин
V. Додаткові зауваження
Література

Глава 15. Диференціювання ПОПЕРЕДНИКІВ У-КЛІТИН У напіврідких агарових культур
I. Введення
II. Експериментальні методи
A. Приготування агару
Б. Приготування середовища
B. Приготування двошарових культур
Г. Виявлення секретується антитіл
Д. Стимулятори та умови росту
III. Короткий перелік отриманих результатів
A. Частота зустрічальності і абсолютне число клоногенних пре-В-клітин в процесі онтогенезу
Б. Тимчасові характеристики процесу утворення зон гемолізу
B. Фенотип клітинної поверхні
Література

Глава 16. ВИДІЛЕННЯ клон АЛЛОРЕАКТІВНИХ Т-хелперів ЛЮДИНИ ТА ВИКОРИСТАННЯ ЇХ У ЯКОСТІ поліклональних АКТИВАТОРІВ В-КЛІТИН
I. Мета і принцип методу
І. Матеріали
A. Середа і добавки
Б. Інтерлейкін-2 (ІЛ-2)
B. Середа для росту Т-клітин (GM)
Г. Клітинні суспензії
Д. Джерело клітин-стимуляторів
Є. Імуноферментний аналіз
III. Методика
A. Відбір аллореактівних Т-клітин
Б. Клонування аллореактівних Т-клітин
B. Культивування клонів аллореактівних Т-клітин
Г. Проліферативний тест
Д. Хелперно тест активації В-клітин
IV. Критична оцінка
Література

Глава 17. Цитолітичної Т-клітинних клонів І гібридоми
I. Введення
II. Матеріали
A. Збалансований сольовий розчин
Б. середу без Са2 + н Mg2 +
B. Сольовий розчин для ГКН-буфера
Г. Розчин поліетиленгліколю (ПЕГ)
Д. Нормальна середу для культивування
Є. Середа, містить фактор росту Т-клітин (ФРТК)
Ж. Селективна середу
III. Методи
A. Імунізація in vivo
Б. Отримання цитотоксичних Т-лімфоцитів (ЦТЛ) в масових культурах
B. Виділення клонів ЦТЛ
Г. Відділення прикріпилися клітин від підкладки
Д. Отримання цитолитических Т-клітинних гібридом
Е. Функціональні тести
Ж. Виявлення зараження мікоплазмою і її ліквідація
3. Заморожування клонів ЦТЛ
IV. Застосування
A. Відбір антиген-специфічних цитолитических Т-клітин in vitro
Б. Клони ЦТЛ
B. Цитолитические Т-клітинні гібридоми
Література

Глава 18. УМОВИ ДЛЯ ОТРИМАННЯ in vitro мишачий ЛІНІЇ ПОПЕРЕДНИКІВ У-КЛІТИН. Залежно від ІНТЕРЛЕІКІНА-3
I. Введення
II. Матеріали
III. Надосадова рідина з культур клітин WEHI-3
IV. Визначення активності ІЛ-3
V. Приготування клітин
А. Клітини кісткового мозку
Б. Клітини селезінки
VI. Отримання ІЛ-3-залежних ліній попередників В-клітин
A. Видалення прикрепляющихся клітин
Б. Розмноження клітин
B. Придушення мієлоїдного і еритроїдного ростків
Г. Заморожування клітинних ліній
VII. Клонування ІЛ-3-завнснмих попередників В-клітин
VIII. Характеристика клітинних ліній
IX. Заключні зауваження
Література

Глава 19. МЕТОДИ ВИЗНАЧЕННЯ клітин, що синтезують РЕВМАТОЇДНИЙ ФАКТОР
I. Введення
II. Метод визначення зон гемолізу
A. Антитіла-мішені
Б. Відновлення та алкілування антитіл-мішеней
B. Вибір гаптенами системи
Г. кон'югірованію арсоната з еритроцитами
Д. Приготування комплементу
Є. Гемолітичний тест для скринінгу гібридом
Ж. Кількісний гемолітичний тест
III. Метод визначення зон гемолізу
А. Метод Ерне
Б. Метод Каннінгема
IV. Радіонммунологіческій аналіз
A. Очищення мишачого IgM з асцитної рідини
Б. Приготування антитіл до ц-ланцюгах
B. Іодірованіе антитіл до ц-ланцюгам за допомогою хлорамінового методу
Г. Очищення мишачого IgG на ДЕАЕ-целюлозі
Д. Адсорбція на пластиці
Є. Інкубація проб
Ж. Інкубація з міченими антитілами до ц-ланцюгах
Література

Глава 20. МЕТОДИ проточного цитофлуориметр І СОРТУВАННЯ КЛІТИН В ІМУНОЛОГІЇ
I. Введення
II. Опис:клітинного сортер
A. Оптична лава
Б. Обробка сигналів
B. Поділ клітин
Г. Зберігання даних
III. Готує реагенти
А. Специфічність реагентів
Б. Вибір флуорохромами
IV. Приготування зразків
А. Приготування клітинних суспензій
Б. Фарбування
V. Поділ клітин
А. Загальні положення
Б. Стерильні умови
VI. Отримання н накопичення даних
А Установка вікон дискримінації
Б. Посилення сигналу і його переклад у цифрову форму
VII. Аналіз даних по одному параметру і інтерпретація результатів
A. Представлення результатів
Б. Отримання кількісних даних
B. Контролі
VIII. Приклади
A. Титрування реагенту
Б. «Слабопозітівние» зразки
B. Високий рівень фону
Г. Артефакти, обумовлені агглютинацией клітин
Подяки
Література

Глава 21. ТАБЛИЦІ ДЛЯ ОЦІНКИ ЕКСПЕРИМЕНТІВ З ВИКОРИСТАННЯМ МЕТОДУ лімітується РОЗВЕДЕННІ
I. Введення
II. Процентний вміст клонів, які походять з однієї клітини
III. Довірчі інтервали
IV. Тест на незалежність в кореляційних матрицях 2X2
Література

Глава 22. ОТРИМАННЯ ЛІМФОЇДНИХ химерами ПТАХІВ
I. Введення
II. Принцип методу
III. Деталі методики
А Генетичні лінії
Б. Обробка реципієнтів клітин
В. Приготування клітин фабріціевой сумки
Г. Зміст: химер
IV. Аналіз химер
А. Препарати лімфоцитів крові, селезінки н тимуса
Б. Вдосконалені умови культивування в відсутність сироватки
В. Цитогенетичні методики
Г. Використання моноклональних антитіл
V. Додаткові зауваження
Література

Глава 23. ЗАРОДКИ ПТАХІВ В ІМУНОЛОГІЇ
I. Введення
II. Матеріали
А. Джерело яєць
Б. Генетичні маркери і моноклональні антитіла
III. Методи
A. Отримання, інкубація і просвічування яєць
Б. Висвердлювання шкаралупи, ін'єкції і забір крові
B. Придушення вироблення аллотипи і класів імуноглобулінів
Г. Обробка циклофосфамідом
Д. Обробка тестостероном
Е. Рання хірургічна бурсектомія
Ж. Пізня хірургічна бурсектомія
3. Реакції «трансплантат проти хазяїна»
І. Парабіоз
К. Пересадки тимуса і фабріціевой сумки зародків
Л. Химери зародок-жовтковий мішок і рекомбінанти бластодерма
М. Опромінення і відновлення кісткового мозку
Література

Глава 24. ВІВЦЯ ЯК ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНА МОДЕЛЬ В ІМУНОЛОГІЇ: імунологічні методи дослідження in vitro І in vivo
I. Введення
II. Зміст: експериментальних овець
III. Процедури
А. Забір крові
Б. Хірургічні процедури
IV. Процедури in vitro
A. Фракціонування клітин
Б. Кріоконсервація лімфоцитів
B. Функціональні тести
Г. Іммуноцітохімія
Подяки
Література

Глава 25. МЕТОДИ ВИВЧЕННЯ ІМУННОЇ СИСТЕМИ Xenopus (Amphibia, Anura)
I. Вступ: імунна система Xenopus
A. Лімфоцити і лімфоїдні органи Xenopus
Б. Імуноглобуліни
B. Головний комплекс гістосумісності (МНС) Xenopus
Г. Імунна відповідь
Д. Своєрідність Xenopus як моделі для досліджень
II. Наявні лінії і види тварин
III. Хірургічні процедури на Xenopus
A. Маркування тварин
Б. Забір крові у дорослих жаб
B. Забір крові та перитонеальній рідині у пуголовків
Г. Тімектомня
Д. Отримання химерних зародків
Є. Пересадка шкіри
IV. Підготовка лімфоцитів для клітинних культур
A. Клітини крові
Б. Суспензії клітин тимуса або селезінки
B. Отримання макрофагів від дорослої жаби
Г. Поділ клітинних популяцій
V. Отримання імунологічних реагентів
А. Одержання антисироваток
Б. Моноклональні антитіла
VI. Вивчення імунної системи
A. Іммунопреціпітація імуноглобулінів та електрофорез
Б. іммунопреціпітаціі мембранних поліпептидів
B. Імунофлуоресценція
Г. гемаглютинації
Д. цитотоксичних Мікротест з клітинами Xenopu
VII. Функціональні методи аналізу імунної відповіді
A. Антитілоутворення і синтез імуноглобулінів
Б. Виявлення антитіл після ізоелектрофокусірованія
B. Оцінка імунної відповіді на клітинному рівні
Г. Методи дослідження клітинного імунітету
VIII. Отримання соматичних гібридів злиттям лімфоцитів Xenopus з клітинами мієломи мишей
IX. Маркери клітин; плоїдності як маркерний ознака
А. Одержання поліплоїдних Xenopus
Б. Способи визначення плоїдності клітин у химер
X. Додаток
Література

Предметний покажчик
Опис:файлу
Файл: 12145_metody-issledovaniy-v-immunologii-v-3-h-tomah.zip
Розмір файлу: 14.18 мб
Посилання для скачування.
Натисніть на кнопку будь-якої соціальної мережі в якій ви активні. Через кілька секунд відкриються посилання для скачування.
{LikeAndRead}
Завантажити фаил з letitbit.net
Завантажити фаил з depositfiles.com
{/LikeAndRead}